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Diseño de un sistema de purificación de inhibidores de carboxipeptidasa A, provenientes de semillas de leguminosas y cereales seleccionadas, que emplee cromatografía de afinidad / Alexander Andrés Unapanta Arias

By: Unapanta Arias, Alexander Andrés.
Contributor(s): Castillo Domínguez, Juan Patricio [director].
Material type: Mixed materialsMixed materialsQuito : EPN, 2018Description: 49 hojas : ilustraciones, 29 x 21 cm + CD-ROM 8793.Subject(s): Química | CromatografíaOther classification: T-FCIA/ Online resources: Texto completo
Contents:
No disponible. Estudiante graduado con paper.
Dissertation note: FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y AGROINDUSTRIA Tesis (Ingeniero Agro Industrial). -- Escuela Politécnica Nacional. 2018 Summary: Resumen .- Esta investigación tuvo como objetivo el diseño de un sistema de purificación de inhibidores de carboxipeptidasa A (CPA), provenientes de semillas de cereales y leguminosas seleccionadas, que emplee cromatografía de afinidad. En la primera etapa, se analizó el efecto del pH y la concentración de NaBH4 como agente reductor, respecto a la retención de la actividad funcional (RAF), en la inmovilización de CPA en un soporte de sepharosa 6B-CL. La inmovilización a pH 9 obtuvo una RAF de 36,39 ± 1,41 U. La reducción con 0,75 mg/mL de suspensión con NaBH4 logró la mejor RAF (43,58 ± 0,82 U). En otra etapa, las harinas de las semillas certificadas fueron desengrasadas y suspendidas para obtener los extractos crudos. La mayor actividad inhibidora específica (AIE) se obtuvo para las semillas de fréjol (1,85 ± 0,14 U/mg) y sangorache (1,81 ± 0,14 U/mg). Las semillas seleccionadas fueron purificadas por tratamientos de ultrafiltración centrífuga a 10 kDa, tratamiento térmico a 60 °C, precipitación salina con (NH4)2SO4 y cromatografía de afinidad. La caracterización molecular y cinética de los extractos inhibidores purificados mostraron pesos moleculares de 5,72 kDa (fréjol) y 4,25 kDa (sangorache); e inhibición mixta con Ki de 0,81 mM (fréjol) y 5,30 mM (sangorache).Summary: Abstract .- The objective of this research was the design of a purification system for carboxypeptidase A (CPA) inhibitors, from selected cereal seeds and legumes, using affinity chromatography. In the first stage, the effect of pH and concentration of NaBH4 as reducing agent, with respect to the retention of functional activity (RAF), in the immobilization of CPA in a support of sepharose 6B-CL was analyzed. The immobilization at pH 9 obtained an RAF of 36.39 ± 1.41 U. The reduction with 0.75 mg / mL of suspension with NaBH4 achieved the best RAF (43.58 ± 0.82 U). In another stage, the flours of the certified seeds were degreased and suspended to obtain the crude extracts. The highest specific inhibitory activity (AIE) was obtained for the seeds of beans (1.85 ± 0.14 U / mg) and sangorache (1.81 ± 0.14 U / mg). The selected seeds were purified by centrifugal ultrafiltration treatments at 10 kDa, thermal treatment at 60 ° C, saline precipitation with (NH4)2SO4 and affinity chromatography. The molecular and kinetic characterization of purified inhibitor extracts showed molecular weights of 5.72 kDa (bean) and 4.25 kDa (sangorache); and mixed inhibition with Ki of 0.81 mM (bean) and 5.30 mM (sangorache).
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Tesis Tesis BIBLIOTECA GENERAL
T-FCIA/0389/CD 8793 (Browse shelf) Ej. 1 Available BC19040444
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FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y AGROINDUSTRIA Tesis (Ingeniero Agro Industrial). -- Escuela Politécnica Nacional. 2018

Bibliografía: páginas 18 - 19.

No disponible. Estudiante graduado con paper.

Resumen .- Esta investigación tuvo como objetivo el diseño de un sistema de purificación de inhibidores de carboxipeptidasa A (CPA), provenientes de semillas de cereales y leguminosas seleccionadas, que emplee cromatografía de afinidad. En la primera etapa, se analizó el efecto del pH y la concentración de NaBH4 como agente reductor, respecto a la retención de la actividad funcional (RAF), en la inmovilización de CPA en un soporte de sepharosa 6B-CL. La inmovilización a pH 9 obtuvo una RAF de 36,39 ± 1,41 U. La reducción con 0,75 mg/mL de suspensión con NaBH4 logró la mejor RAF (43,58 ± 0,82 U). En otra etapa, las harinas de las semillas certificadas fueron desengrasadas y suspendidas para obtener los extractos crudos. La mayor actividad inhibidora específica (AIE) se obtuvo para las semillas de fréjol (1,85 ± 0,14 U/mg) y sangorache (1,81 ± 0,14 U/mg). Las semillas seleccionadas fueron purificadas por tratamientos de ultrafiltración centrífuga a 10 kDa, tratamiento térmico a 60 °C, precipitación salina con (NH4)2SO4 y cromatografía de afinidad. La caracterización molecular y cinética de los extractos inhibidores purificados mostraron pesos moleculares de 5,72 kDa (fréjol) y 4,25 kDa (sangorache); e inhibición mixta con Ki de 0,81 mM (fréjol) y 5,30 mM (sangorache).

Abstract .- The objective of this research was the design of a purification system for carboxypeptidase A (CPA) inhibitors, from selected cereal seeds and legumes, using affinity chromatography. In the first stage, the effect of pH and concentration of NaBH4 as reducing agent, with respect to the retention of functional activity (RAF), in the immobilization of CPA in a support of sepharose 6B-CL was analyzed. The immobilization at pH 9 obtained an RAF of 36.39 ± 1.41 U. The reduction with 0.75 mg / mL of suspension with NaBH4 achieved the best RAF (43.58 ± 0.82 U). In another stage, the flours of the certified seeds were degreased and suspended to obtain the crude extracts. The highest specific inhibitory activity (AIE) was obtained for the seeds of beans (1.85 ± 0.14 U / mg) and sangorache (1.81 ± 0.14 U / mg). The selected seeds were purified by centrifugal ultrafiltration treatments at 10 kDa, thermal treatment at 60 ° C, saline precipitation with (NH4)2SO4 and affinity chromatography. The molecular and kinetic characterization of purified inhibitor extracts showed molecular weights of 5.72 kDa (bean) and 4.25 kDa (sangorache); and mixed inhibition with Ki of 0.81 mM (bean) and 5.30 mM (sangorache).

Alexander Andrés Unapanta Arias cedido 2018/05/11 71207 $ 0.20 1 Biblioteca General

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